在2019年12月m6A RNA甲基化研究總結中我們介紹了一篇較為罕見的做組織m6A MeRIP-seq的文章，發(fā)表在European Journal of Heart Failure (IF:13.965)雜志上。這篇文章主要展示了健康狀態(tài)下和心力衰竭狀態(tài)下人及小鼠心臟m6A RNA甲基化修飾圖譜的信息。
主要研究內容及結果如下
1.健康小鼠心臟的m6A圖譜利用MeRIP-seq分析了5只成年小鼠心臟樣本中m6A修飾的轉錄本比例（圖1B），對m6A peak進行motif分析發(fā)現了一致性的RRACH（圖1C）。對m6A peak的分布區(qū)域進行分析發(fā)現主要富集在翻譯終止位點（圖1D），然后對富集在5’UTR、CDS區(qū)及3’UTR的轉錄本進行富集分析（圖1F）以及與表達水平的相關性分析（圖1G），發(fā)現分布區(qū)域不同，富集的通路和表達相關性也會有差異。
3.健康人心臟的m6A圖譜m6A修飾相關酶METTL3、METTL14和FTO在人類心臟中均有表達（圖3A）。對人非心力衰竭的心臟樣本（n = 5）進行MeRIP-seq發(fā)現大量轉錄本含有m6A修飾（圖3B），motif分析也發(fā)現了一致性的RRACH（圖3C）。這些轉錄本中m6A分布與小鼠中類似（圖3D），相同的轉錄本中多數m6A修飾位于CDS區(qū)和5’UTR區(qū)，而特有的一些轉錄本修飾在3’UTR區(qū)（圖3E）。分布區(qū)域不同，富集的通路和表達相關性也會有差異（圖3F、G）。與小鼠的數據相似，5’UTR和CDS區(qū)發(fā)生m6A修飾的轉錄本水平和修飾水平存在一定相關性，而3’UTR區(qū)沒有顯著相關性（圖3H）。而健康小鼠和健康人的心臟樣本間存在很多m6A修飾轉錄本的重合，主要富集在代謝相關的通路上，包括心臟和循環(huán)系統(tǒng)的發(fā)育等（圖3I）。
4.心力衰竭人的m6A修飾變化
利用MeRIP-Seq和RNA-seq比較非心力衰竭和晚期心力衰竭人的樣本（每組n = 6），與小鼠數據相似，m6A修飾顯著改變的轉錄本數目（n = 1246）要高于表達水平變化的基因（n = 228，圖4A）。再對兩組樣本中差異甲基化轉錄本進行通路富集分析（圖4B、C），以及人和小鼠兩個物種重疊的差異甲基化的403個轉錄本進行通路富集（圖4D）。
5.心力衰竭過程中差異的m6A修飾與變化的多聚體結合的轉錄本有關
有研究表明RNA甲基化可能通過影響核糖體占有率來影響mRNA翻譯，為了進一步分析這項內容，研究人員利用多聚核糖體分析技術（polysome profiling）比較了TAC誘導8周和對照組小鼠心臟組織中正在翻譯的轉錄本（每組n = 5）。其中發(fā)現TAC誘導8周后225個轉錄本在核糖體片段中顯著富集或缺失，富集或缺失的轉錄本參與的通路也不相同（圖5A）。TAC組差異甲基化和差異核糖體結合的轉錄本顯示顯著正相關（圖5B）。小鼠和人心力衰竭差異甲基化重疊的403個轉錄本與小鼠核糖體結合的轉錄本也有顯著正相關（圖5C）。富集分析發(fā)現這些轉錄本的通路對心臟功能和代謝過程是必需的（圖5D）。分別利用qPCR、MeRIP-qPCR、western blot驗證了小鼠和人中部分基因的表達水平、m6A修飾水平和蛋白水平（圖5E、F）。
6.Fto敲除的小鼠顯示更差的心臟表型
為了驗證m6A水平確實對正常的心臟功能的影響，條件性敲除心肌細胞中的Fto（圖6A）。與對照組相比，條件性敲除小鼠顯示出射血分數（圖6B）、短軸縮短率（圖6C）的顯著下降，以及擴張程度的顯著增加（圖6D、E）。
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